Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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γ-GCSc双切口酶质粒(h): sc-401133-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- γ-GCSc 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- γ-GCSc双切酶质粒（h）和γ-GCSc双切酶质粒（h2）编码针对GCLC的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：γ-GCSc: sc-390811，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
γ-GCSc双切口酶质粒(h) | sc-401133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
γ-GCSc双切口酶质粒(h2) | sc-401133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GCLC 编码谷氨酸-半胱氨酸连接酶（glutamate–cysteine ligase，γ-GCSc）的催化亚基。该酶是谷胱甘肽生物合成过程中的限速酶，负责催化生成 γ-谷氨酰半胱氨酸。通过调控细胞内谷胱甘肽储量，γ-GCSc 维持氧化还原稳态、促进亲电体解毒，并保持线粒体与胞质的抗氧化能力，从而进一步影响对 ROS（活性氧）敏感的信号传导与代谢适应。GCLC 活性在氧化应激应答通路中受到严格调控，包括由 NRF2/KEAP1 驱动的转录程序，并会影响细胞对铁死亡（ferroptosis）及其他应激诱导细胞死亡机制的易感性。GCLC 依赖的谷胱甘肽代谢失衡与多种情境下对氧化应激和外源化合物（xenobiotics）反应的改变相关，例如肝病、神经退行性疾病以及肿瘤生物学等。
γ-GCSc 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 GCLC 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GCLC内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏GCLC的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了GCLC基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。