γ Enolase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400763-ACT

ENO2 codifica a γ-enolase humana (enolase específica de neurônios), uma metaloenzima glicolítica que catalisa a interconversão entre 2-fosfoglicerato e fosfoenolpiruvato, sustentando a produção de ATP e o fluxo metabólico. Além de sua função metabólica, a γ-enolase é enriquecida em neurônios e células neuroendócrinas e está associada a respostas ao estresse celular, programas de diferenciação e manutenção da integridade neuronal. A expressão de ENO2 é frequentemente usada para estudar estados de linhagem neuroendócrina, reprogramação metabólica e glicólise alterada em contextos associados a doenças, incluindo distúrbios neurológicos e biologia tumoral. Como um nó de via no metabolismo central do carbono, ENO2 oferece um ponto de entrada acessível para investigar como o controle da glicólise se articula com o equilíbrio redox e a regulação do estado celular.

γ Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ENO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ENO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ENO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ Enolase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ENO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ Enolase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ Enolase em células tumorais com expressão de ENO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.