γ Enolase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400763-ACT

ENO2はヒトのγエノラーゼ（ニューロン特異的エノラーゼ）をコードする。γエノラーゼは解糖系の金属酵素で、2-ホスホグリセリン酸とホスホエノールピルビン酸の相互変換を触媒し、ATP産生と代謝フラックスを支える。代謝機能にとどまらず、γエノラーゼはニューロンおよび神経内分泌細胞に多く発現し、細胞ストレス応答、分化プログラム、ならびに神経細胞の健全性維持に関与するとされる。ENO2の発現は、神経内分泌系譜の状態、代謝リプログラミング、疾患に関連する状況（神経疾患や腫瘍生物学を含む）における解糖系の変化を研究する際に、しばしば指標として用いられる。中心炭素代謝における経路ノードとして、ENO2は、解糖系の制御がレドックスバランスや細胞状態の制御とどのように連動するかを検討するための、扱いやすい入り口を提供する。

γ Enolase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ENO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ Enolase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ENO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はENO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ Enolaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のENO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ Enolase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびENO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ Enolase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。