γ-catenin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401640-NIC

JUPはヒトのγ-カテニン（プラコグロビン）をコードしており、カドヘリン依存性接着複合体をアクチン細胞骨格および中間径フィラメント細胞骨格へ連結する、アルマジロリピートを持つタンパク質です。接着結合（アドヘレンスジャンクション）やデスモソームにおいて、γ-カテニンは細胞間接着、組織の完全性、メカノトランスダクションを支えるほか、共通の結合パートナーを介してWnt/β-カテニン関連の転写プログラムにも影響し得ます。JUPの発現量や接着装置への局在の変化は、上皮バリア機能の破綻や細胞の遊走・分化の変化と関連しており、がん生物学や、デスモソーム機能不全に結びつく心皮膚症候群（cardiocutaneous phenotypes）の研究において重要です。これらの役割により、γ-カテニンはジャンクションの組み立て、細胞骨格の構築、そして組織恒常性を制御するシグナル伝達ネットワークの交差点に位置づけられます。

γ-catenin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における JUP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、JUP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、JUPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、JUPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。