δ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419849

概要

Csn1s2bはδ-カゼインをコードしており、δ-カゼインは乳腺で発現して分泌される乳タンパク質で、授乳期におけるカゼインミセル構造の形成やカルシウム／リン酸結合に寄与します。カゼイン遺伝子クラスターの一部として、その転写は、乳タンパク質の合成と分泌を協調的に制御するプロラクチン／JAK2–STAT5シグナル伝達や、その他のホルモン応答性経路によって、妊娠期から授乳期にかけて厳密に調節されています。カゼイン発現パターンの変化は、乳腺上皮の分化や泌乳能（ラクトジェニック・コンピテンス）の指標として用いられており、カゼインファミリー遺伝子は乳腺の発生やストレス応答の研究で頻繁にモニターされています。マウスモデルでは、カゼイン構成要素の撹乱により、乳成分、哺乳仔の栄養、ならびに泌乳関連表現型の基盤となる機構の理解に役立ちます。

δ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCsn1s2b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Csn1s2b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Csn1s2bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、δ-caseinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、δ-caseinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Csn1s2b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• δ-caseinの機能に不可欠なCsn1s2bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Csn1s2bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• δ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびδ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Csn1s2b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  δ-casein HDRプラスミド（m）および δ-casein HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCsn1s2bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCsn1s2b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。