βENaC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401371-ACT

SCNN1Bは、上皮性ナトリウムチャネル（ENaC）のβサブユニット（βENaC）をコードしており、上皮組織の頂端膜を介するアミロライド感受性Na⁺輸送の中核を担う構成要素です。βENaCはαおよびγサブユニットと協調してナトリウム再吸収と体液恒常性を支え、イオン輸送を上皮バリア機能や体液量調節経路と結び付けます。ENaC活性は、タンパク質分解によるプロセシング、ユビキチン依存的なトラフィッキング（NEDD4Lによる制御を含む）、およびチャネル量や開口確率を調整するホルモン応答性シグナル伝達と統合されて制御されています。SCNN1Bの発現または機能の変化は、塩分取り扱い異常や気道表面液の調節異常に関わる疾患と関連付けられており、上皮生理や疾患関連のイオン輸送表現型を研究する上で重要な標的です。

βENaC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCNN1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

βENaC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCNN1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCNN1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性βENaCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCNN1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβENaC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCNN1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβENaC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。