β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419848

概要

Csn2はマウスのβ-カゼインをコードしており、β-カゼインは乳腺上皮細胞から分泌される主要なリン酸化タンパク質の一つで、カゼインミセルの形成や、乳汁中のカルシウム‐リン酸輸送に寄与します。その発現は妊娠期および授乳期に、プロラクチンとグルココルチコイドのシグナル伝達によって厳密に制御され、とりわけJAK2/STAT5経路と、それに協調する転写プログラムを介して、乳腺の分化と分泌機能が統合的に調節されます。β-カゼインは泌乳分化の代表的なマーカーであるため、Csn2の攪乱は、上皮成熟、タンパク質分泌、カルシウム恒常性に対する内分泌制御を解析する手段として広く用いられています。さらに、カゼイン遺伝子の制御異常は、乳腺発生における異常な状態のモデル化や、ホルモン刺激および炎症性シグナルが乳タンパク質のトランスクリプトームをどのように作り替えるかを評価するうえでも有用です。

β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCsn2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Csn2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Csn2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-caseinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-caseinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Csn2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-caseinの機能に不可欠なCsn2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Csn2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβ-casein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Csn2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-casein HDRプラスミド（m）および β-casein HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCsn2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCsn2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。