β-casein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419848

Descripción general

Csn2 codifica la β‑caseína de ratón, una fosfoproteína secretada principal de las células epiteliales mamarias que contribuye al ensamblaje de las micelas de caseína y al transporte de calcio–fosfato en la leche. Su expresión está estrechamente regulada durante el embarazo y la lactancia por la señalización de prolactina y glucocorticoides, de forma destacada a través de JAK2/STAT5 y de programas transcripcionales cooperativos que coordinan la diferenciación de la glándula mamaria y su función secretora. Dado que la β‑caseína es un marcador canónico de la diferenciación lactogénica, la alteración de Csn2 se utiliza ampliamente para investigar el control endocrino de la maduración epitelial, la secreción de proteínas y la homeostasis del calcio. Los cambios en la regulación de los genes de caseína también son útiles para modelar estados desregulados del desarrollo mamario y para evaluar cómo las señales hormonales e inflamatorias remodelan el transcriptoma de proteínas de la leche.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-casein (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Csn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Csn2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Csn2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-casein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Csn2 para la investigación de la señalización de β-casein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Csn2 críticos para la función de β-casein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Csn2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-casein CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido β-casein CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Csn2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-casein (m) y el plásmido HDR β-casein (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Csn2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Csn2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.