β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424741

概要

B3gnt2 は、ゴルジ体に局在する β1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼである β3Gn-T2 をコードし、N-グリカン、O-グリカン、および糖脂質（グリコスフィンゴ脂質）上のポリ N-アセチルラクトサミン鎖を伸長します。β3Gn-T2 は糖鎖の分岐や伸長を形作ることで、ガレクチン結合を含むレクチン介在性の認識イベントに影響し、その結果として細胞接着、遊走、ならびに細胞膜における受容体の配置・組織化に影響を及ぼし得ます。B3gnt2 依存的な糖鎖修飾は、免疫・炎症シグナルの調節に寄与し、複数の組織におけるグリコカリックスの組成も変化させます。β3Gn-T ファミリー酵素の発現や活性の変化は、細胞間相互作用の破綻や腫瘍生物学、免疫機能不全に関連する表現型と結び付くことが報告されており、マウスモデルでの機序解明研究を支持する知見となっています。

β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるB3gnt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、B3gnt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、B3gnt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β3Gn-T2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β3Gn-T2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、B3gnt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β3Gn-T2の機能に不可欠なB3gnt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、B3gnt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβ3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、B3gnt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β3Gn-T2 HDRプラスミド（m）および β3Gn-T2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはB3gnt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のB3gnt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。