β2A Tubulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400054-ACT

TUBB2A codifica a tubulina β2A, um componente central do heterodímero α/β-tubulina que polimeriza em microtúbulos para sustentar a arquitetura do citoesqueleto, o tráfego intracelular e a dinâmica do fuso mitótico. Ao regular o crescimento e a estabilidade dos microtúbulos, a tubulina β2A contribui para processos como migração neuronal, orientação axonal e progressão do ciclo celular por vias dependentes de microtúbulos. A expressão alterada de isotipos de tubulina ou a disfunção da rede de microtúbulos é frequentemente investigada em contextos como fenótipos do neurodesenvolvimento, instabilidade cromossômica e divisão celular aberrante. Como um hub do citoesqueleto, TUBB2A oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar proteínas associadas a microtúbulos, transporte por motores e sinalização ligada à mitose.

β2A Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBB2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β2A Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBB2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBB2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β2A Tubulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBB2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β2A Tubulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β2A Tubulin em células tumorais com expressão de TUBB2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.