β2-Adaptin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-428053

Descripción general

Ap2b1 codifica la subunidad β2-adaptina del complejo adaptador AP-2, un componente central de la endocitosis mediada por clatrina en células de ratón. La β2-adaptina ayuda a acoplar la selección de carga en la membrana plasmática con el ensamblaje de la cubierta de clatrina, coordinando la internalización y el reciclaje de receptores, transportadores y complejos de señalización. A través de estas funciones, AP-2 influye en vías dependientes del tráfico de membranas, como la señalización de receptores tirosina quinasa, el ciclo de vesículas sinápticas y la dinámica del citoesqueleto. La alteración del tráfico mediado por AP-2 es ampliamente relevante para estudios de neurobiología, metabolismo y redes de señalización oncogénica, donde un recambio alterado de receptores y la clasificación endosomal pueden remodelar las respuestas del estado celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β2-Adaptin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ap2b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ap2b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ap2b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β2-Adaptin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ap2b1 para la investigación de la señalización de β2-Adaptin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ap2b1 críticos para la función de β2-Adaptin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ap2b1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ap2b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β2-Adaptin (m) y el plásmido HDR β2-Adaptin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ap2b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ap2b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.