α-tectorin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405876-ACT

TECTA codifica a α-tectorina, uma importante glicoproteína não colagênica da membrana tectória do ouvido interno que ajuda a organizar a arquitetura da matriz extracelular necessária para uma transdução mecanoelétrica eficiente pelas células ciliadas cocleares. Por meio de seus papéis na montagem da matriz e no acoplamento estrutural entre a membrana tectória e os estereocílios, a α-tectorina sustenta as forças de cisalhamento induzidas pelo som e o ajuste fino de frequências. A disrupção de TECTA pode comprometer a integridade da membrana tectória e alterar a função auditiva, tornando-o um gene-chave para o estudo da biologia da matriz extracelular sensorial. Variações em TECTA estão associadas a formas hereditárias de perda auditiva, conectando a função da α-tectorina a fenótipos relevantes para doença em modelos de pesquisa auditiva.

α-tectorin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TECTA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-tectorin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TECTA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TECTA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-tectorin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TECTA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-tectorin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-tectorin em células tumorais com expressão de TECTA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.