ZnT-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405830

Übersicht

SLC30A7 kodiert den Zinktransporter ZnT-7, ein Mitglied der SLC30-(ZnT)-Familie, der den Zinkexport aus dem Zytosol in intrazelluläre Kompartimente vermittelt und so die Zinkhomöostase sowie die kompartimentierte Verfügbarkeit von Metallionen unterstützt. Durch die Regulation der Zinkverteilung innerhalb des sekretorischen Weges und des endomembranären Systems beeinflusst ZnT-7 die Aktivität von Metalloproteinen, das Redoxgleichgewicht und zinkabhängige Signalprozesse, die den Zellstoffwechsel und Stressantworten prägen. Veränderte Zinktransportprozesse wurden mit einer gestörten Biologie von Insulingranula, inflammatorischer Signalgebung und oxidativem Stress in Verbindung gebracht, wodurch SLC30A7 für Studien zu Stoffwechselstörungen und damit zusammenhängenden komplexen Krankheitsmechanismen von Interesse ist. Als Regulator der Zinkhomöostase ist ZnT-7 zudem relevant für Untersuchungen der Organellenfunktion und der metallabhängigen Enzymreifung in menschlichen Zellen.

Das ZnT-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC30A7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC30A7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC30A7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZnT-7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC30A7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZnT-7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC30A7-Exone abzielen, die für die ZnT-7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC30A7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZnT-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZnT-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC30A7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZnT-7 HDR-Plasmid (h) und ZnT-7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC30A7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC30A7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.