Partículas Lentivirales de Activación (h) ZnT-1: sc-403094-LAC

El SLC30A1 humano codifica ZnT-1, un exportador de zinc de la membrana plasmática que protege a las células de la sobrecarga de zinc al disminuir el Zn2+ citosólico y modular la señalización dependiente de metales. Al acoplar el eflujo de zinc a la homeostasis celular, ZnT-1 influye en las respuestas al estrés oxidativo, la susceptibilidad a la apoptosis y la amortiguación regulada por metalotioneínas, con efectos posteriores sobre programas transcripcionales que dependen de proteínas de unión a zinc. La alteración del manejo del zinc y la desregulación de SLC30A1 se han asociado con procesos de neurobiología y relacionados con la excitabilidad, así como con contextos más amplios en los que el desequilibrio de metales contribuye a la lesión celular y la inflamación. Esto convierte a ZnT-1 en un punto de entrada útil para estudiar la regulación dependiente de zinc de la fisiología de membrana y de las vías de adaptación al estrés en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZnT-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SLC30A1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZnT-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SLC30A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ZnT-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SLC30A1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.