Zic4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407517-NIC

ZIC4は、亜鉛フィンガー型転写因子Zic4をコードしており、胚のパターニングや神経発生の過程でDNAに結合して遺伝子発現プログラムを制御する核内調節因子である。Zic4は、神経細胞の分化、発生中の脳における領域アイデンティティ、小脳形態形成を協調させる転写ネットワークに関与し、背側正中線や後脳構造を形成するWNTやSHHなどの発生シグナル伝達経路とも交差する。ZIC4の用量変化や調節機能の破綻は、先天性脳奇形や神経発達表現型と関連づけられており、神経系系列における転写制御を研究するための有用な遺伝子座となっている。細胞ベースのモデルでは、ZIC4の改変（撹乱）により、前駆細胞の運命決定、神経細胞の成熟、系統特異的なクロマチン状態を司る遺伝子制御ネットワークの解明が進む。

Zic4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ZIC4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ZIC4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ZIC4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ZIC4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。