ZHX2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436490-ACT

マウスZhx2は、ジンクフィンガーおよびホメオボックス2（ZHX2）転写因子をコードしており、主として核内に局在する制御因子として、細胞分化、増殖、ならびに代謝恒常性を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。ZHX2は、DNA結合性のジンクフィンガー領域およびホメオボックス領域を介して転写抑制／活性化ネットワークの中で機能し、組織特異的な転写状態の形成に関与します。マウス系では、Zhx2活性の変化が、肝臓における遺伝子発現の異常、発生表現型、さらに状況依存的な発がん性シグナルや腫瘍抑制プログラムへの影響と関連づけられています。これらの特性により、ZHX2は系譜アイデンティティの転写制御や、疾患に関連する遺伝子制御回路を解析するうえで有用なノードとなります。

ZHX2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Zhx2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZHX2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Zhx2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZhx2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZHX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZhx2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZHX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZhx2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZHX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。