ZBTB1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411630-ACT

ZBTB1（zinc finger and BTB domain containing 1）は、BTB/POZを介したタンパク質間相互作用と、C2H2型ジンクフィンガーによるDNA結合を統合し、系譜特異的かつ状況依存的な遺伝子発現プログラムを形成する転写調節因子をコードします。造血および免疫細胞生物学において、ZBTB1は分化・増殖・ゲノム安定性の制御に関与するとされ、転写制御をDNA損傷応答やクロマチン状態の維持と結び付けます。ZBTB1活性の変化は、リンパ系発生やストレス応答を司る制御ネットワークを乱し得るため、免疫不全様表現型、血液学的な制御異常、腫瘍性の転写回路に関する研究で重要となります。核内因子としてのZBTB1は、転写抑制／活性化、クロマチン構造化、チェックポイント関連プロセスの経路マッピングにおいてもしばしば検討されます。

ZBTB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZBTB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZBTB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZBTB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZBTB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZBTB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZBTB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZBTB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZBTB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZBTB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。