YT521-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406333-ACT

O YTHDC1 humano codifica a YT521-B, um leitor nuclear contendo domínio YTH de N6-metiladenosina (m6A) que acopla a metilação de RNA ao splicing do pré-mRNA, à exportação de mRNA e ao metabolismo de RNA no núcleo. Ao se ligar a transcritos modificados por m6A e coordenar a seleção de sítios de splicing com fatores de splicing ricos em serina/arginina, a YT521-B ajuda a moldar o repertório de isoformas de transcritos e programas de expressão gênica. A regulação dependente de YTHDC1 se cruza com o processamento de RNA associado à cromatina e com redes transcricionais responsivas ao estresse que influenciam o controle do ciclo celular e a diferenciação. A sinalização de m6A desregulada e padrões aberrantes de splicing de RNA implicam vias associadas ao YTHDC1 em estados transcricionais oncogênicos e fenótipos do neurodesenvolvimento, sustentando estudos mecanísticos em modelos relevantes para doenças.

YT521-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de YTHDC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

YT521-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus YTHDC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição YTHDC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de YT521-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus YTHDC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de YT521-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via YT521-B em células tumorais com expressão de YTHDC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.