Yes Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423744-ACT

O gene Yes1 de camundongo codifica uma tirosina-quinase não receptora da família SRC, que transduz sinais a jusante de receptores tirosina-quinase e de complexos de adesão célula–célula para regular proliferação, sobrevivência e remodelamento do citoesqueleto. A atividade de YES1 se conecta às vias de sinalização MAPK/ERK e PI3K/AKT e pode influenciar a dinâmica de adesões focais e a motilidade celular por meio da fosforilação de proteínas adaptadoras e de arcabouço. Alterações na sinalização de YES1 têm sido associadas a estados de sinalização oncogênica, fenótipos de resposta a fármacos e reconfiguração de vias acionadas por fatores de crescimento em múltiplos contextos tumorais. Em modelos de pesquisa básica e translacional, a modulação de Yes1 apoia estudos sobre redundância de redes de sinalização entre quinases da família SRC e sobre o crosstalk entre vias que controla diferenciação e homeostase tecidual.

Yes O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Yes1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Yes O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Yes1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Yes1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Yes. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Yes1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Yes no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Yes em células tumorais com expressão de Yes1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.