WTAP Lentiviral Activation Particles (m): sc-425635-LAC

Mouse Wtap kodiert WTAP, eine zentrale regulatorische Komponente des m6A-RNA-Methyltransferase-Komplexes, die mit METTL3/METTL14 kooperiert, um die Ablagerung von N6‑Methyladenosin auf mRNA und lncRNA zu steuern. WTAP hilft, die kotranskriptionelle RNA-Prozessierung zu koordinieren, einschließlich alternativem Spleißen, mRNA-Stabilität, nukleärem Export und Translation, und prägt damit Zellzyklusprogression, Differenzierungsprogramme und Stressantworten. Über seine Rolle in der epitranskriptomischen Regulation beeinflusst WTAP Signalwege, die mit der Erhaltung von Stammzellen und der Festlegung von Zelllinien verbunden sind, und wurde in krankheitsrelevanten Modellen mit fehlregulierten proliferativen und entwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Veränderte, WTAP-abhängige m6A-Muster können die Transkriptom-Ausgabe sowie Proteinexpressionsnetzwerke umgestalten, was Wtap zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von RNA-Metabolismus und Kontrolle der Genexpression macht.

WTAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Wtap-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

WTAP Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Wtap-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen WTAP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Wtap-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.