Wnt-5b Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423719

Visão geral

O gene Wnt5b de camundongo codifica a glicoproteína secretada Wnt-5b, um ligante Wnt não canônico que regula a polaridade celular, a migração direcional e a remodelação do citoesqueleto durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A Wnt-5b sinaliza preferencialmente por vias independentes de β-catenina, como a polaridade celular planar e a sinalização Wnt/Ca2+, envolvendo receptores como Frizzled e co-receptores como as tirosina-quinases da família ROR para modular a atividade a jusante de JNK, PKC e pequenas GTPases. Essas vias influenciam a morfogênese, o padrão neuronal e a comunicação estroma–epitélio, e a expressão desregulada de WNT5B tem sido associada a programas de diferenciação alterados e a comportamentos celulares invasivos em contextos relacionados a doenças. Como um nó de via que se cruza com a sinalização inflamatória e da matriz extracelular, a Wnt-5b é frequentemente investigada em modelos de desenvolvimento, metabolismo e biologia do microambiente tumoral.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Wnt-5b (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Wnt5b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Wnt5b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Wnt5b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Wnt-5b.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Wnt5b para a investigação da sinalização de Wnt-5b, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Wnt5b críticos para a função Wnt-5b
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Wnt5b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Wnt-5b Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Wnt-5b Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Wnt5b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Wnt-5b Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Wnt-5b (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Wnt5b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Wnt5b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.