Wnt-5a Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423718-LAC

O gene Wnt5a de camundongo codifica a Wnt-5a, uma glicoproteína secretada que sinaliza preferencialmente por vias Wnt não canônicas para regular o padrão de tecidos, a polaridade celular e a migração direcional. A Wnt-5a interage com receptores como o ROR2 e membros específicos da família Frizzled para modular a polaridade celular planar e a sinalização dependente de Ca2+, com efeitos a jusante sobre a remodelação do citoesqueleto e a atividade de pequenas GTPases. Em muitos contextos, ela antagoniza ou remodela programas transcricionais de β-catenina/TCF, coordenando diferenciação e morfogênese ao longo do desenvolvimento e da homeostase de tecidos adultos. A sinalização de Wnt5a desregulada tem sido associada a microambientes inflamatórios, comunicação estromal–epitelial aberrante e fenótipos de invasão alterados, tornando-a um ponto frequentemente estudado na biologia do câncer, na fibrose e em modelos de sinalização imune.

As Partículas de Ativação Lentivirais Wnt-5a (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Wnt5a numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Wnt-5a (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Wnt5a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Wnt-5a. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Wnt5a e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.