Wnt-10b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401465-ACT

WNT10B codifica a glicoproteína secretada Wnt-10b, um ligante modificado por lipídios que ativa complexos de receptores Frizzled/LRP para regular programas transcricionais canônicos de Wnt/β-catenina e uma sinalização não canônica dependente do contexto. A Wnt-10b influencia decisões de destino celular, proliferação e diferenciação, com papéis de destaque na osteogênese e na adipogênese, bem como no crosstalk entre epitélio e estroma durante o desenvolvimento e a remodelação tecidual. A expressão desregulada de WNT10B ou a saída de sua sinalização pode perturbar redes de expressão gênica dependentes de β-catenina e alterar o crosstalk da via com processos associados a TCF/LEF, BMP e Notch. Essas alterações de via são frequentemente investigadas em modelos de controle de crescimento aberrante, remodelação associada à fibrose e biologia tumoral, nos quais a atividade da via Wnt modula fenótipos semelhantes a células-tronco e respostas do microambiente.

Wnt-10b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT10B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-10b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT10B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT10B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-10b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT10B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-10b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-10b em células tumorais com expressão de WNT10B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.