WISP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423705-ACT

Wisp1 codifica a WISP-1 (proteína 1 da via de sinalização induzível por WNT1), um fator matricelular secretado da família CCN que integra sinais da matriz extracelular com a sinalização por fatores de crescimento e pela via Wnt. Em tecidos de camundongo, a WISP-1 modula a adesão, a migração, a proliferação e a sobrevivência celulares ao influenciar vias ligadas à atividade da β-catenina, à sinalização mediada por integrinas e ao remodelamento do microambiente estromal. Sua expressão é comumente associada a programas fibrogênicos, à diferenciação osteogênica e condrogênica e a respostas semelhantes ao reparo de feridas que moldam a arquitetura tecidual. A sinalização desregulada de WISP-1 tem sido estudada em contextos de fibrose patológica, remodelamento associado à inflamação e interações tumor–estroma relevantes para a biologia do câncer e a pesquisa em metástase.

WISP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Wisp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WISP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Wisp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Wisp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WISP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Wisp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WISP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WISP-1 em células tumorais com expressão de Wisp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.