WDR59 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405648

Descripción general

WDR59 (dominio de repeticiones WD 59) es una proteína andamiaje con repeticiones WD40 que funciona como componente central del complejo GATOR2, un regulador clave aguas arriba de la señalización de mTORC1. A través de GATOR2, WDR59 contribuye a las vías de detección de aminoácidos que controlan la activación lisosomal de mTORC1, influyendo así en la síntesis de proteínas, los programas de crecimiento sensibles a nutrientes y la autofagia. La alteración de la señalización dependiente de WDR59 puede remodelar el metabolismo celular y las respuestas al estrés, procesos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en otros trastornos vinculados a una actividad desregulada de mTOR. En consecuencia, WDR59 se estudia de forma rutinaria por su papel en integrar la disponibilidad de nutrientes con el crecimiento celular y la homeostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WDR59 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WDR59 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WDR59 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WDR59 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WDR59.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WDR59 para la investigación de la señalización de WDR59, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WDR59 críticos para la función de WDR59
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WDR59 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WDR59 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido WDR59 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WDR59. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WDR59 (h) y el plásmido HDR WDR59 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WDR59 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WDR59 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.