VRL-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401648-NIC

O TRPV2 humano codifica o canal semelhante ao receptor vaniloide VRL-1, um canal iônico TRP não seletivo e permeável a Ca2+ que integra estímulos mecânicos, calor e sinalização lipídica para modular a excitabilidade da membrana e a dinâmica do cálcio intracelular. A atividade do VRL-1 influencia vias dependentes de cálcio ligadas à remodelação do citoesqueleto, ao tráfego vesicular e a sinalizações a jusante associadas a MAPK e PI3K, que coordenam migração celular, diferenciação e respostas ao estresse. O canal é amplamente estudado em contextos de células imunes e neurais, nos quais o influxo de Ca2+ evocado por estímulos pode modular programas inflamatórios e a sinalização sensorial. Alterações na expressão de TRPV2 ou na função do canal têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças na biologia do câncer, em respostas ao estresse de cardiomiócitos e em processos neuroinflamatórios, sustentando seu uso como alvo mecanístico em pesquisas focadas em vias de sinalização.

VRL-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TRPV2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TRPV2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TRPV2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TRPV2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.