VPS51 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410709

Übersicht

VPS51 kodiert eine zentrale Untereinheit des Golgi-assoziierten Tethering-Komplexes GARP (Golgi-associated retrograde protein), der den retrograden Transport vom Endosom zum trans-Golgi-Netzwerk (TGN) vermittelt. Durch die Förderung des Einfangens von Vesikeln und der SNARE-abhängigen Fusion am TGN trägt VPS51 zur Aufrechterhaltung der Golgi-Organisation bei und unterstützt das korrekte Recycling von Sortierungsrezeptoren und Frachtproteinen. Eine Störung der GARP-Funktion beeinträchtigt die endolysosomale Homöostase, die Proteinsortierung und glykosylierungsabhängige Reifungswege, mit nachgelagerten Effekten auf zelluläre Stressantworten. Verändertes retrogrades Trafficking ist relevant für Modelle der Neurobiologie, der Immun-Signalübertragung und proliferativer Phänotypen, bei denen die Integrität des Membrantransports die Rezeptorverfügbarkeit und Signalausgänge beeinflusst.

Das VPS51 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VPS51-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VPS51-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VPS51 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPS51-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VPS51-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPS51-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VPS51-Exone abzielen, die für die VPS51-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VPS51-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPS51 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VPS51 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VPS51-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPS51 HDR-Plasmid (h) und VPS51 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VPS51-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VPS51-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.