VPS39 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404507

概要

VPS39は、後期エンドソーム‐リソソーム融合およびオートファゴソーム‐リソソーム融合を仲介するHOPSテザリング複合体の中核サブユニットをコードしており、エンドリソソームの成熟とカーゴ分解を支えています。Rab GTPase依存的な膜テザリングと、SNAREによって駆動される膜融合の協調を通じて、VPS39はリソソーム恒常性、受容体のターンオーバー、マクロオートファジーのフラックスに寄与します。HOPS構成因子の破綻は小胞輸送を乱し、未分解物質の蓄積、エンドソーム由来シグナルの変化、ならびに神経変性疾患やリソソーム蓄積症様の表現型に関連するストレス応答を引き起こし得ます。そのためVPS39は、オートファジー、エンドリソソーム動態、そして細胞内輸送の疾患関連欠陥に関する研究において重要です。

VPS39 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVPS39遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VPS39内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VPS39のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPS39タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPS39シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VPS39欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPS39の機能に不可欠なVPS39エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VPS39ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPS39 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVPS39 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VPS39遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPS39 HDRプラスミド（h）および VPS39 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVPS39ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVPS39標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。