Von Hippel Lindau/VHL Double Nickaseプラスミド (h): sc-400528-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Von Hippel Lindau/VHL Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Von Hippel Lindau/VHLダブルニカースプラスミド（h）およびVon Hippel Lindau/VHLダブルニカースプラスミド（h2）は、VHLを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Von Hippel Lindau/VHL 抗体 (VHL40): sc-135657
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Von Hippel Lindau/VHL Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Von Hippel Lindau/VHL Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VHLは、常酸素条件下で水酸化されたHIF-αをユビキチン化し、プロテアソーム分解へ導くCullin 2–RING型E3ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識サブユニットである、von Hippel–Lindau（VHL）腫瘍抑制因子をコードする。VHLは、酸素感知を血管新生、代謝、赤血球産生、細胞外マトリックス関連プログラムの転写制御と結び付けることで、細胞の恒常性と適切な低酸素応答の維持に寄与する。VHLの欠失または機能不全はHIFシグナル伝達を破綻させ、血管生物学、ミトコンドリア代謝、プロテオスタシスに関連する経路を組み替える。VHLの異常は遺伝性VHL病と密接に関連しており、低酸素駆動性の腫瘍生物学や微小環境への適応を解析する目的で、腎細胞癌モデルにおいて頻繁に研究されている。
Von Hippel Lindau/VHL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における VHL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、VHL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、VHLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、VHLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。