Vimentin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400035-ACT

VIM codifica a vimentina, uma proteína de filamento intermediário do tipo III que constitui um componente essencial da rede do citoesqueleto em células mesenquimais. A vimentina regula a forma celular, a resistência mecânica, o posicionamento de organelos e a dinâmica de adesão, e interage com os sistemas de actina e de microtúbulos para coordenar programas de migração e resposta a feridas. A sua expressão é frequentemente utilizada como marcador da transição epitélio–mesênquima (EMT) e está associada a alterações na remodelação do citoesqueleto, na renovação das adesões focais e em vias de sinalização que controlam a motilidade e a invasão. A desregulação da expressão de vimentina tem sido associada a fibrose, estados inflamatórios e fenótipos de progressão do cancro, tornando-a um alvo relevante para o estudo da plasticidade celular e da adaptação ao stress.

Vimentin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VIM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vimentin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VIM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VIM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vimentin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VIM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vimentin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vimentin em células tumorais com expressão de VIM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.