VHR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405733-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VHRO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase VHR (h) e o Plasmídeo Double Nickase VHR (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DUSP3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:VHR Anticorpo (F-2): sc-374161
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VHR Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VHR Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A fosfatase de dupla especificidade 3 (DUSP3), também conhecida como fosfatase relacionada à H1 do vaccínia (VHR), é uma fosfatase citosólica de dupla especificidade que desfosforila resíduos de fosfotirosina e fosfoserina/treonina em MAPKs, com atividade relatada sobre membros das famílias ERK e JNK. Ao modular a amplitude e a duração da sinalização de MAPK, a VHR contribui para o controle da progressão do ciclo celular, da sinalização de resposta ao estresse e de programas transcricionais a jusante de estímulos por fatores de crescimento e citocinas. A DUSP3 também tem sido associada à regulação da sinalização imune e da proliferação celular por meio de seus efeitos sobre os estados de fosforilação de quinases e a expressão gênica a jusante. Alterações na expressão ou na atividade de DUSP3/VHR foram descritas em contextos de sinalização oncogênica e na biologia de tumores hematológicos ou sólidos, motivando estudos mecanísticos de reorganização de vias em modelos relevantes para doença.
VHR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DUSP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DUSP3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DUSP3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DUSP3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.