VDAC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404240-ACT

VDAC3（電位依存性陰イオン選択性チャネルタンパク質3）は、ミトコンドリア外膜に存在するポーリンで、細胞質とミトコンドリア間の代謝物およびイオンの交換に寄与し、酸化的リン酸化や細胞のエネルギー代謝に影響を与えます。電位依存性陰イオンチャネル（VDAC）ファミリーの一員として、ミトコンドリア膜透過性の制御、レドックス恒常性、アポトーシスシグナル伝達経路とのクロストークの調節にも関与します。VDAC3は、ミトコンドリアの品質管理プロセスや酸化ストレス応答と関連づけられており、特に高いエネルギー需要をもつ組織で重要性が示唆されています。VDAC3に関わるミトコンドリア輸送・シグナル伝達の破綻は、神経変性、心血管・代謝異常、不妊、がんに伴う代謝リモデリングなどの研究で注目されています。

VDAC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VDAC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VDAC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VDAC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVDAC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VDAC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVDAC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVDAC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVDAC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVDAC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。