Vav CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400606-ACT

ヒトVAV1はVavをコードしており、Vavは造血系細胞特異的なグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として、RAC1などのRhoファミリーGTPアーゼを活性化し、アクチン細胞骨格の再編成、細胞接着、遊走を協調的に制御します。Vavは免疫受容体およびインテグリンシグナルの下流で機能し、チロシンキナーゼ依存的なリン酸化イベントを、T細胞受容体（TCR）シグナル伝達、NF-κB/MAPKの活性化、免疫シナプス形成などの経路へと結び付けます。VAV1シグナルの制御異常は、リンパ球の発生異常や不適切な免疫活性化と関連し、造血器悪性腫瘍や免疫関連疾患への関与も示唆されています。シグナル伝達のハブとして、VAV1はリンパ球活性化の閾値、サイトカイン産生、ならびに細胞骨格依存的なトラフィッキングにおける役割が広く研究されています。

Vav CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VAV1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Vav CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VAV1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVAV1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Vavの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVAV1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVav依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVAV1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVav経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。