V-ATPase α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403882-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- V-ATPase α1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase V-ATPase α1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase V-ATPase α1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATP6V1A. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:V-ATPase α1 Anticorpo (4F5): sc-293336
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
V-ATPase α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A codifica a subunidade catalítica A do domínio V1 da H+-ATPase vacuolar (V-ATPase) α1, um componente central da bomba de prótons dependente de ATP que acidifica endossomos, lisossomos e vesículas secretoras. Ao controlar o pH das organelas, a V-ATPase α1 sustenta a endocitose mediada por receptores, o fluxo autofágico, a degradação lisossomal, o tráfego vesicular e o acoplamento ao sensor de nutrientes mTORC1 na superfície do lisossomo. A atividade adequada da V-ATPase também é necessária para o processamento de proteínas e lipídios no Golgi e em endossomos, influenciando a apresentação de antígenos e a renovação (turnover) de sinais. A acidificação dependente da V-ATPase desregulada tem sido associada à neurodegeneração, à adaptação metabólica e invasão de células tumorais e a defeitos na proteostase e na função sináptica, tornando o ATP6V1A um alvo útil para estudos mecanísticos focados em vias.
V-ATPase α1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP6V1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP6V1A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP6V1A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP6V1A interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.