V-ATPase α1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-403882-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- V-ATPase α1 Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- V-ATPase α1 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 V-ATPase α1 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 ATP6V1A을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 V-ATPase α1 Antibody (4F5): sc-293336
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
V-ATPase α1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase α1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A는 액포형 H+-ATPase(V-ATPase) α1의 V1 도메인에 존재하는 촉매성 A 소단위를 암호화하며, 이는 엔도좀, 리소좀, 분비 소낭을 산성화하는 ATP 구동 양성자 펌프의 핵심 구성 요소입니다. V-ATPase α1는 소기관 pH를 조절함으로써 수용체-매개 엔도사이토시스, 자가포식 플럭스, 리소좀 분해, 소낭 수송, 그리고 리소좀 표면에서의 mTORC1 영양 감지 신호와의 연계를 지원합니다. 또한 적절한 V-ATPase 활성은 골지체 및 엔도좀에서의 단백질·지질 가공에도 필요하며, 항원 제시와 신호전달의 턴오버에 영향을 줍니다. V-ATPase 의존적 산성화의 이상 조절은 신경퇴행, 종양세포의 대사 적응 및 침윤, 그리고 단백질 항상성(proteostasis)과 시냅스 기능 결함과 연관되어 있어, ATP6V1A는 경로 중심의 기전 연구를 위한 유용한 표적입니다.
V-ATPase α1 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 ATP6V1A 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 ATP6V1A 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 ATP6V1A의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, ATP6V1A 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.