Plasmide CRISPR d'Activation (h) utrophin: sc-400522-ACT

Le gène humain **UTRN** code l’utrophine, une protéine cytosquelettique apparentée à la dystrophine qui relie le réseau d’actine au complexe dystrophine–glycoprotéines au niveau du sarcolemme et de domaines membranaires spécialisés tels que la jonction neuromusculaire. L’utrophine contribue à la stabilité membranaire, à la mécanotransduction et à l’organisation de la signalisation associée à l’adhérence en coordonnant les interactions entre les composants de la matrice extracellulaire, les récepteurs transmembranaires et les échafaudages intracellulaires. Son expression est régulée au cours du développement et souvent enrichie dans les régions synaptiques, ce qui étaye les études portant sur l’architecture des fibres musculaires et le maintien des synapses. Les modifications de l’abondance ou de la localisation de l’utrophine sont fréquemment étudiées dans le cadre de la biologie des dystrophies musculaires et des voies compensatoires influençant l’intégrité du muscle.

utrophin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UTRN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

utrophin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UTRN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UTRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de utrophin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UTRN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de utrophin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie utrophin dans les cellules tumorales présentant une expression de UTRN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.