USP9X CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402285

概要

USP9X は、主要な基質からユビキチン鎖を除去することでタンパク質の安定性を調節し、プロテオスタシスおよびシグナル伝達の強度を形成するユビキチン特異的プロテアーゼをコードしています。NF-κB シグナル伝達、DNA 損傷応答ネットワーク、膜輸送関連プロセスなどの経路を調節することを通じて、細胞生存やストレス応答の制御に関与することが示されています。制御タンパク質やユビキチン–プロテアソーム系の構成要素のターンオーバーに影響を与えることで、USP9X は細胞周期進行、アポトーシス、分化プログラムに作用します。USP9X の活性または発現の破綻は、がん生物学や神経発達に関連する表現型を含む複数の疾患関連文脈でシグナル恒常性の変化と関連づけられており、機構解明研究の有用な標的となっています。

USP9X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUSP9X遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、USP9X内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、USP9Xのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、USP9Xタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、USP9Xシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、USP9X欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• USP9Xの機能に不可欠なUSP9Xエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、USP9Xゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• USP9X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUSP9X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、USP9X遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  USP9X HDRプラスミド（h）および USP9X HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUSP9Xホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUSP9X標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。