USP6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406687-ACT

USP6 (peptidase 6 específica de ubiquitina) codifica uma enzima desubiquitinante que modula a estabilidade das proteínas e a saída de sinalização ao reverter a conjugação de ubiquitina. Por meio da regulação do turnover e do tráfego dependentes de ubiquitina, a USP6 pode influenciar vias ligadas à sinalização por receptores, à remodelação do citoesqueleto e a programas transcricionais inflamatórios, incluindo respostas associadas ao NF-κB. A expressão desregulada de USP6 está fortemente associada a neoplasias mesenquimais benignas, como o cisto ósseo aneurismático e a fasciite nodular, nas quais eventos de troca de promotor impulsionam uma transcrição aberrante. Como resultado, a USP6 é amplamente estudada para entender como alterações na desubiquitinação remodelam redes de sinalização celular e fenótipos relevantes para o microambiente tumoral.

USP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP6 em células tumorais com expressão de USP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.