USP22 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403660-ACT

USP22 (peptidase específica de ubiquitina 22) é uma enzima desubiquitinante que atua como um componente regulador essencial do complexo coativador transcricional SAGA, no qual remove ubiquitina da histona H2B para modular a acessibilidade da cromatina e o nível de transcrição. Por meio do controle epigenético da expressão gênica, a USP22 influencia a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e programas de diferenciação, integrando a sinalização por ubiquitina à regulação transcricional. Alterações na atividade de USP22 têm sido associadas à desregulação de sinais proliferativos e à reprogramação transcricional observadas em múltiplos contextos relacionados ao câncer, sustentando seu uso como um ponto de entrada molecular para o estudo de redes oncogênicas de expressão gênica. Em modelos de células humanas, a perturbação de USP22 fornece um mecanismo para investigar como a desubiquitinação de histonas afeta a transcrição específica de vias e a proteostase.

USP22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP22 em células tumorais com expressão de USP22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.