UPII CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423621

概要

Upk2は、尿路上皮の傘細胞（アンブレラ細胞）の分化マーカーであるウロプラキンII（UPII）をコードしており、頂端側尿路上皮プラークの組み立てと、尿―血液バリアの維持に寄与する（テトラスパニン関連）分子です。UPIIは膜輸送に関与するとともに、特殊な脂質マイクロドメインを組織化するウロプラキン複合体の形成に関与し、上皮の極性およびバリア機能を支えます。尿路上皮におけるウロプラキン組成や分化プログラムの変化は、バリア完全性の破綻、炎症、ならびに尿路損傷に対する感受性の増加と関連づけられています。マウスモデルでは、Upk2発現は膀胱の病態生理における尿路上皮系譜の同一性や上皮リモデリングを研究するために一般的に用いられます。

UPII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUpk2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Upk2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Upk2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UPIIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UPIIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Upk2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UPIIの機能に不可欠なUpk2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Upk2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UPII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUPII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Upk2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UPII HDRプラスミド（m）および UPII HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUpk2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUpk2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。