Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) UKHC: sc-402349-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)UKHC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UKHC (h) y el plásmido de doble nickasa UKHC (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KIF5B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UKHC Anticuerpo (F-5): sc-133184
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) UKHC | sc-402349-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) UKHC | sc-402349-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KIF5B codifica la cadena pesada de kinesina-1 expresada de forma ubicua (UKHC), un motor dependiente de microtúbulos que impulsa, mediante ATP, el transporte anterógrado de cargas membranosas, orgánulos y complejos proteicos a lo largo de los axones y de otros tipos celulares polarizados. A través de interacciones con las cadenas ligeras de kinesina y con adaptadores de carga, KIF5B coordina el tráfico intracelular, contribuye a la dinámica del huso mitótico y ayuda a mantener la polaridad celular y la organización del citoesqueleto. Estas funciones se entrecruzan con vías que regulan el transporte neuronal, la distribución mitocondrial y el tráfico vesicular en los sistemas secretor y endocítico. La regulación alterada de KIF5B o sus reordenamientos se han vinculado a contextos de señalización oncogénica y a fenotipos de tráfico alterado relevantes para la biología tumoral y la neurobiología.
UKHC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KIF5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KIF5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KIF5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KIF5B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.