UGT1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423602

Übersicht

Das murine Ugt1a2 kodiert die UDP-Glucuronosyltransferase 1A2 (UGT1A2), ein mikrosomales konjugierendes Phase-II-Enzym, das die Glucuronidierung vielfältiger endogener Metaboliten und Xenobiotika katalysiert. Durch die Übertragung von Glucuronsäure auf lipophile Substrate erhöht UGT1A2 deren Löslichkeit und fördert die Elimination über hepatische und extrahepatische Entgiftungswege. Die Aktivität von Ugt1a2 trägt zum umfassenderen UGT1A-abhängigen Netzwerk bei, das die Verstoffwechselung von Chemikalien, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie Wechselwirkungen mit dem durch Cytochrom P450 gesteuerten Stoffwechsel moduliert. Eine genetische oder experimentelle Beeinflussung der UGT-vermittelten Konjugation ist für Studien zu veränderter Pharmakokinetik, Anfälligkeit gegenüber chemisch bedingten Gewebeschäden und stoffwechselassoziierten Phänotypen in Maus-Krankheitsmodellen relevant.

Das UGT1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ugt1a2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ugt1a2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ugt1a2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UGT1A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ugt1a2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UGT1A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ugt1a2-Exone abzielen, die für die UGT1A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ugt1a2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UGT1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UGT1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ugt1a2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UGT1A2 HDR-Plasmid (m) und UGT1A2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ugt1a2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ugt1a2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.