Ufc1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409943

Panoramica

UFC1 codifica l’enzima coniugante di tipo E2 Ufc1, un componente centrale del sistema di coniugazione UFM1 (ubiquitin-fold modifier 1) che promuove l’ufmilazione dei substrati proteici. Questa via coordina la proteostasi nel reticolo endoplasmatico, la segnalazione dello stress del RE e i processi di controllo qualità legati alla funzione della via secretoria, con ruoli riportati nel controllo qualità associato ai ribosomi e nell’omeostasi cellulare. Nei modelli sperimentali, l’alterazione dei componenti dell’ufmilazione, incluso UFC1, è stata associata a fenotipi di neurosviluppo, difetti ematopoietici e adattamento allo stress cellulare correlato al cancro, a supporto della sua rilevanza per la biologia delle malattie. UFC1 è quindi spesso studiato in contesti in cui la funzione del RE, la resilienza allo stress e il mantenimento del proteoma influenzano le decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ufc1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UFC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UFC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UFC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ufc1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UFC1 per lo studio della segnalazione di Ufc1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UFC1 critici per la funzione di Ufc1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UFC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ufc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ufc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UFC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ufc1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ufc1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UFC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UFC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.