UDG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407264-ACT

CCNO (ciclina O) codifica um regulador do tipo ciclina implicado em programas associados ao ciclo celular e na diferenciação de epitélios multiciliados, nos quais sustenta a amplificação de centríolos e a geração eficiente de cílios móveis. Por meio de efeitos sobre a ciliogênese e a biologia do centrossomo, o CCNO contribui para a função epitelial coordenada em tecidos que dependem da depuração mucociliar. Alterações na atividade do CCNO têm sido associadas a multiciliogênese defeituosa e à fisiopatologia relacionada aos cílios, tornando-o relevante para estudos de homeostase do epitélio das vias aéreas e de processos de desenvolvimento dirigidos por cílios. Em contextos de pesquisa biomédica, o CCNO é, portanto, um alvo útil para investigar o controle transcricional da ciliogênese, o remodelamento epitelial e as consequências a jusante da função ciliar comprometida.

cyclin O O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCNO sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cyclin O O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCNO em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCNO, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cyclin O. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCNO nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cyclin O no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cyclin O em células tumorais com expressão de CCNO silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.