UDG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403189

Panoramica

UNG umano codifica la glicosilasi dell’uracile nel DNA (UDG), un enzima chiave della riparazione per escissione di basi che avvia la rimozione dell’uracile dal DNA generato dalla deaminazione della citosina o dall’incorporazione errata di dUMP durante la replicazione. Escidendo l’uracile e creando un sito abasico da processare a valle, UNG contribuisce a preservare la stabilità del genoma e a limitare la mutagenesi sia nel genoma nucleare sia in quello mitocondriale. L’attività di UNG si interfaccia con le risposte allo stress replicativo, la segnalazione del danno al DNA e le vie che contrastano lesioni guidate dalla deaminazione, includendo processi rilevanti per la diversificazione degli anticorpi e per la restrizione innata del DNA retrovirale. La disregolazione della riparazione dell’uracile e dei relativi intermedi di riparazione è stata associata a un aumento del carico mutazionale e a fenotipi di instabilità genomica studiati in ambito oncologico, immunologico e nelle interazioni ospite–patogeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UDG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UNG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UNG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UNG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UDG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UNG per lo studio della segnalazione di UDG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UNG critici per la funzione di UDG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UNG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UDG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UDG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UNG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UDG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UDG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UNG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UNG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.