Ubr4 Plasmide Double Nickase (m): sc-427303-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ubr4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ubr4 Double Nickase Plasmid (m) e il Ubr4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ubr4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ubr4 Antibody (21-Y): sc-100615
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ubr4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ubr4 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-427303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ubr4 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che partecipa alla via ubiquitina–proteasoma della regola dell’N-terminale (N-end rule), collegando il riconoscimento dei substrati alla proteostasi e al turnover proteico regolato. UBR4 è stato implicato nel traffico endocitico, nell’omeostasi delle proteine di membrana e, più in generale, nel controllo ubiquitina-dipendente delle risposte cellulari allo stress. Attraverso queste funzioni, UBR4 influenza la sopravvivenza cellulare, la differenziazione e i processi neuronali e di sviluppo in cui è necessaria una degradazione proteica finemente controllata. La disregolazione delle reti di ubiquitinazione e proteostasi che coinvolgono le ligasi della famiglia UBR è rilevante per studi di neurobiologia, fenotipi cardiometabolici e vulnerabilità di segnalazione associate al cancro nei sistemi modello.
Ubr4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ubr4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ubr4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ubr4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ubr4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.