UBE2E3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423576

Visão geral

Ube2e3 codifica a enzima conjugadora de ubiquitina UBE2E3 em camundongos, um componente E2 do sistema ubiquitina–proteassoma que transfere ubiquitina de enzimas E1 para ligases E3, regulando a renovação de proteínas e a sinalização. Por meio da ubiquitinação, a UBE2E3 contribui para a proteostase, respostas ao estresse e o controle de vias associadas ao ciclo celular e a danos no DNA, ao modular a estabilidade de substratos e programas transcricionais a jusante. Como moduladora do controle de qualidade proteica e da sinalização regulatória por ubiquitina, alterações na atividade da UBE2E3 podem influenciar a homeostase celular em contextos relevantes para a neurobiologia, a inflamação e fenótipos associados ao câncer. O estudo de redes de ubiquitinação dependentes de UBE2E3 ajuda a definir como enzimas E2 ajustam a dinâmica das vias e a especificidade por substratos em diferentes tecidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UBE2E3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ube2e3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ube2e3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ube2e3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UBE2E3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ube2e3 para a investigação da sinalização de UBE2E3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ube2e3 críticos para a função UBE2E3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ube2e3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UBE2E3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo UBE2E3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ube2e3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UBE2E3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR UBE2E3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ube2e3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ube2e3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.