Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE1 (h): sc-402844

Présentation

UBA1 code pour l’enzyme d’activation du modificateur de type ubiquitine 1 (UBE1), l’enzyme E1 qui initie l’activation de l’ubiquitine dépendante de l’ATP et transfère l’ubiquitine aux enzymes de conjugaison E2 afin d’assurer le fonctionnement du système ubiquitine–protéasome. Par ce point de contrôle en amont, UBE1 influence le renouvellement global des protéines, la protéostasie et les réponses au stress, en affectant des processus tels que la progression du cycle cellulaire, la signalisation des dommages à l’ADN et la régulation des voies de l’immunité innée. Une perturbation de l’activité d’UBA1 peut remodeler les réseaux de signalisation dépendants de l’ubiquitine et modifier la stabilité de protéines régulatrices clés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence, des dépendances de protéostasie associées au cancer et de troubles liés à l’X, dont l’amyotrophie spinale. Parce que l’UBE1 se situe au sommet de l’ubiquitination, une perturbation génétique constitue une approche directe pour disséquer la contribution de la voie de l’ubiquitine à l’homéostasie cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBA1 pour l'étude de la signalisation de UBE1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBA1 essentiels à la fonction de UBE1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE1 plasmide HDR (h) et le UBE1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.