TudorSN Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-425184-NIC-2

O gene murino Snd1 codifica a TudorSN (staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1), uma proteína multifuncional de ligação a RNA que integra o processamento de RNA a programas de regulação gênica ao participar do complexo de silenciamento induzido por RNA, da repressão mediada por microRNAs e de eventos associados ao spliceossomo. A TudorSN contribui para o controle da estabilidade e da tradução de mRNAs e tem sido relacionada à correregulação transcricional, à dinâmica de grânulos de estresse e a vias de sinalização lipídica/metabólica em diversos tipos celulares. A atividade desregulada de Snd1/TudorSN associa-se a estados proliferativos e inflamatórios alterados e é frequentemente estudada no contexto de sinalização oncogênica, regulação imune e neurobiologia. A perturbação genética de Snd1 em modelos murinos sustenta estudos mecanísticos de regulação pós-transcricional, vias de pequenos RNAs e redes de interação RNA–proteína, usando edição baseada em CRISPR, genômica funcional e ensaios direcionados a vias.

TudorSN O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Snd1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Snd1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Snd1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Snd1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.