TTP Lentiviral Activation Particles (h): sc-400722-LAC

Humanes ZFP36 kodiert Tristetraprolin (TTP), ein AU-reiches-Element-bindendes RNA-bindendes Protein, das eine rasche Deadenylierung und den Abbau von mRNA fördert, um die Expression inflammatorischer Mediatoren und Immediate-Early-Gene zu begrenzen. TTP rekrutiert CCR4–NOT und verwandte Abbaumaschinerie, um den Transkriptumsatz zu regulieren, und prägt dadurch angeborene Immun-Signalwege, Stressantworten sowie die Rückkopplungskontrolle von Zytokinpfaden wie TNF/NF-κB und MAPK. Eine dysregulierte ZFP36/TTP-Aktivität ist mit aberranter Zytokinproduktion und chronischer Entzündung assoziiert; zudem wurde eine veränderte Expression in verschiedenen Kontexten der Immundysregulation sowie bei krebsassoziierten Phänotypen beschrieben, die mit posttranskriptioneller Kontrolle zusammenhängen. Als Knotenpunkt in Netzwerken der mRNA-Stabilität wird ZFP36 häufig genutzt, um RNA-Abbau, Makrophagen-Aktivierungsprogramme und signalabhängiges Transkriptom-Remodeling zu untersuchen.

TTP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ZFP36-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TTP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ZFP36-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TTP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ZFP36-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.