TTBK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403998-ACT

TTBK1 (tau tubulin kinase 1) é uma quinase de serina/treonina enriquecida em neurônios, implicada na regulação da dinâmica do citoesqueleto por meio da fosforilação de proteínas associadas a microtúbulos, incluindo a tau, e da modulação do crescimento de neuritos. Está ligada a vias que controlam a estabilidade dos microtúbulos, o transporte axonal e a proteostase, com conexões funcionais a eventos de sinalização dependentes de fosforilação que influenciam a polaridade neuronal e a manutenção sináptica. Alterações na atividade de TTBK1 têm sido estudadas no contexto da biologia de doenças neurodegenerativas, nas quais a fosforilação desregulada de tau e a remodelação do citoesqueleto são características moleculares centrais. Em modelos celulares humanos, a perturbação da expressão de TTBK1 ajuda a investigar efeitos de rede impulsionados por quinases sobre respostas ao estresse neuronal e a organização do citoesqueleto.

TTBK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTBK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTBK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTBK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTBK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTBK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTBK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTBK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTBK1 em células tumorais com expressão de TTBK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.