TSGA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423525

Visão geral

Rsph1 codifica um componente da cabeça do raio radial, necessário para a arquitetura axonemal adequada e para o batimento coordenado de cílios e flagelos, sustentando a ciliogênese motora e o transporte baseado em microtúbulos em epitélios multiciliados. Por meio do seu papel no axonema 9+2, a RSPH1 contribui para vias que regulam a depuração mucociliar e a motilidade dos espermatozoides, ligando sua função à homeostase das vias aéreas e à biologia reprodutiva. A desregulação de proteínas do raio radial está associada a fenótipos de discinesia ciliar primária, incluindo doença respiratória crônica e defeitos de lateralidade, tornando o Rsph1 um lócus útil para o estudo de processos de desenvolvimento e inflamação mediados por cílios. Em modelos murinos, a perturbação de Rsph1 permite investigar mecanisticamente as relações entre estrutura e função de cílios móveis em tecidos respiratórios e reprodutivos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TSGA2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rsph1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rsph1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rsph1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TSGA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rsph1 para a investigação da sinalização de TSGA2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rsph1 críticos para a função TSGA2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rsph1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TSGA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TSGA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rsph1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TSGA2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TSGA2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rsph1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rsph1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.