TSGA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423525

Übersicht

Rsph1 kodiert eine Komponente des Radialspeichenkopfes, die für eine korrekte axonemale Architektur und ein koordiniertes Schlagen von Zilien und Flagellen erforderlich ist, und unterstützt damit die Bildung motiler Zilien sowie den mikrotubuli-basierten Transport in multiziliierten Epithelien. Über seine Rolle im 9+2-Axonem trägt RSPH1 zu Signal- und Regulationswegen bei, die die mukoziliäre Clearance und die Spermienmotilität steuern, und verknüpft seine Funktion damit mit der Homöostase der Atemwege und der Reproduktionsbiologie. Störungen von Radialspeichenproteinen sind mit Phänotypen der primären ziliären Dyskinesie assoziiert, darunter chronische Atemwegserkrankungen und Lateralisierungsdefekte, was Rsph1 zu einem nützlichen Lokus für die Untersuchung zilienspezifischer Entwicklungs- und Entzündungsprozesse macht. In Mausmodellen ermöglicht eine Beeinflussung von Rsph1 die mechanistische Analyse von Struktur-Funktions-Beziehungen motiler Zilien in Atemwegs- und Reproduktionsgeweben.

Das TSGA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rsph1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rsph1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rsph1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TSGA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rsph1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TSGA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rsph1-Exone abzielen, die für die TSGA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rsph1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TSGA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TSGA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rsph1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TSGA2 HDR-Plasmid (m) und TSGA2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rsph1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rsph1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.