TSGA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423525

概要

Rsph1 は、適切な軸糸（アクソネーム）構築と、線毛・鞭毛の協調した拍動に必要な放射状スポーク頭部の構成要素をコードし、多線毛上皮における運動性線毛形成および微小管依存性輸送を支えます。9+2 型アクソネームにおける役割を通じて、RSPH1 は粘液線毛クリアランスや精子運動性を制御する経路に関与し、その機能は気道の恒常性維持および生殖生物学と結び付けられます。放射状スポークタンパク質の障害は、慢性呼吸器疾患や左右軸決定異常などを含む原発性線毛運動不全症（PCD）の表現型と関連しており、Rsph1 は線毛に駆動される発生・炎症過程を研究するうえで有用な遺伝子座です。マウスモデルでは、Rsph1 の攪乱により、呼吸器および生殖組織にまたがる運動性線毛の構造—機能関係を機序的に検証できます。

TSGA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRsph1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rsph1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rsph1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSGA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSGA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rsph1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSGA2の機能に不可欠なRsph1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rsph1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSGA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSGA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rsph1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSGA2 HDRプラスミド（m）および TSGA2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRsph1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRsph1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。