TS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423565

概要

Tymsはチミジル酸合成酵素（thymidylate synthase：TS）をコードしており、dUMPからdTMPへの変換を触媒する葉酸依存性の主要酵素です。TSは、DNA複製および修復に必要なチミジンヌクレオチドプールの維持に寄与します。TS活性は、de novoピリミジン生合成ネットワークを介して、1炭素代謝をS期進行、ゲノム安定性、ならびにミトコンドリアDNAおよび核DNA合成と結び付けています。マウス系の研究では、Tymsの制御やTS量は、ヌクレオチド不均衡が複製ストレスやDNA損傷シグナルを引き起こし得る増殖性組織や高速に増殖する細胞モデルで一般的に解析されます。TSに関連する代謝フラックスの破綻は、がん生物学や葉酸経路研究で頻繁に検討される、細胞周期制御の変化やゲノム不安定性の機構と関連します。

TS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTyms遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tyms内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tymsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tyms欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSの機能に不可欠なTymsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tymsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tyms遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TS HDRプラスミド（m）および TS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTymsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTyms標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。